人参皂甙HPLC检测方法
1.标准品的制备:
分别精密称取人参皂甙Rg1、人参皂甙Re、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rc、人参皂甙Rb2和人参皂甙Rd适量至20ml容量瓶,用80%甲醇超声溶解后稀释到刻度。用0.45μm滤膜过滤后备用。
2.样品的制备:
精密称取供试品适量到50ml容量瓶,用80%甲醇超声溶解后稀释到刻度。用0.45μm滤膜过滤后备用。
3.检测步骤
按以下检测条件检测
仪器:Agilent 1100
色谱柱:Agilent HC-C18 4.6*250mm 5um
检测器:DAD
进样量:20ul
流速:1.0 ml/min
温度:35℃
检测波长:203nm
梯度洗脱程序:
T/min | A(水) | B(乙腈) |
0 | 81 | 19 |
35 | 81 | 19 |
55 | 71 | 29 |
70 | 71 | 29 |
100 | 60 | 40 |
102 | 0 | 100 |
112 | 0 | 100 |
115 | 81 | 19 |
4.分析
分别取标准溶液和样品溶液注入液相色谱仪,以保留时间定性,以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
- 参考文献
参照《中国药典》2015年版一部
人参总皂甙UV检测方法
1.仪器与设备
1.1 754紫外-可见分光光度计
1.2 电子天平
2.试剂与试液
2.1 甲醇
2.2 高氯酸
2.3 77%硫酸
2.4 1%香草醛-高氯酸试液:取香草醛100mg,加高氯酸溶解定容至10ml,摇匀既得。(现用现配)
3.操作
3.1对照溶液配制
精密称取人参皂甙Re对照品10.0mg,置10ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀既得对照品溶液。
3.2 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液 20ul、40ul、80ul、120ul、160ul、200ul,分别置于具塞试管中,低温挥去溶剂,加入1%香草醛-高氯酸试液0.5ml,置60℃恒温水浴上充分混匀后加热15分钟,立即用冰水冷却2分钟,加人77%硫酸溶液5ml,摇匀;以试剂作空白。消除气泡后照紫外-可见分光光度法,在540nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。
3.3测定
取本品约50mg,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取50ul,照标准曲线的制备项下的方法,自”置于具塞试管中”起依法操作,测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的量,计算结果乘以0.84,即得。
本品按干燥品计,含人参总皂苷以人参皂苷Re计,应为65%〜85%。
4.计算:
式中:
ω——试样中总皂甙量(人参皂甙Re计),g /100 g;
m1——标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的量,mg;
m0——供试品称样量,mg;
V0——供试品稀释体积,ml;
V1——供试品吸样体积,ml。
计算结果保留二位有效数字。
- 参考文献
参照《中国药典》2015年版一部