虎杖收载于《中国药典》2000年版一部，采用分光光度法测定总葸醌控制含量。虎杖含蒽醌类衍生物，以游离型为主，有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等成分?，本文采用高效液相色谱法测定虎杖药材中大黄素的含量，方法快速、方便、可靠。
1仪器与试药
Agilent1100型组合式全自动高效液相色谱仪。虎杖药材(市售)，大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2方法和结果
2.1色谱条件
色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)，流速：1.0mlmin，柱温：室温，测定波长：254nm，用外标法检测，进样量：5.OμL。
2.2供试品溶液的制备
取本品粉末(过三号筛)约0.5g(同时另取本品粉末在105℃测定干燥失重)，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇约80ml，超声处理(功率250W，频率30kHz)30min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，加热回流1h，冷却，加氯仿30nIl，继续回流2h，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次5ml，合并氯仿提取液，通过装有无水硫酸钠的漏斗，置50ml容量瓶中，滤器用少量氯仿洗涤，洗液并人滤液中，加氯仿至刻度，摇匀，精密量取氯仿液10ml，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3对照品溶液的制备
精密称取大黄素对照品9.81mg，置100ml容量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品储备液(浓度为0.0981mg/ml)。精密量取lml，加甲醇稀释至25ml，作为对照品溶液。
2.4线性关系考察
将上述大黄素对照品溶液，分别进样2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL、12.0μL。记录峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X)作图，得标准曲线，计算回归方程：Y=4.0387×103X一0.844，r=0.9999，线性范围为7.848×10-3～4.709×10-2.
2.5精密度试验
取同一供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0.2%，表明精密度良好。
2.6重复性试验
取同一批虎杖样品5份，按上述方法测定大黄素的含量，结果RSD为0.5%。
2.7溶液稳定性试验
取“2.6”项下供试品溶液，在0，4，8，12，16，20，24h分别进样5μL，记录峰面积，结果峰面积的RSD为0.9%，表明供试品溶液在24h内均稳定。
2.8回收率试验
精密称取已知含量为1.6%样品适量，分别精密加入大黄素对照品储备液15ml，按上述方法测定，计算加样回收率。
2.9样品测定
取虎杖药材按上述方法测定样品中大黄素的含量，结果见表2。将对照品溶液、供试品溶液分别进样sva，依本法测定，样品和对照品在同一保留时间位置上有一相应的色谱峰。
3讨论
取大黄素对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果显示在219nm、254nm、292nm处均有最大吸收峰，由于254nm处的吸收度较强且不受溶剂峰干扰，故选择254nm作为测定吸收波长，与《中国药典》规定一致。
实验表明，本品经水解后再用氯仿提取4次，大黄素已基本提取完全。
从线性、回收率、重现性、溶液稳定性等试验结果可以看出，用HPLC法测定虎杖中大黄素的含量，准确性高，重现性好，且操作简便快速。