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燕窝酸合成提取工艺技术

01 不可逆合成燕窝酸的微生物细胞转化

微生物细胞

微生物细胞

技术简介:

1、 燕窝酸是一类含有9个碳原子并具有吡喃糖结构的酸性氨基糖。其中最常见和代表性的燕窝酸分子是5‑氨基‑3,5‑二脱氧‑D‑甘油‑D‑半乳壬酮糖,最新研究表明燕窝酸具有多样的生物学功能(例如:抗粘附、抗肿瘤、抗病毒、提高婴儿记忆力等等),被美国、欧盟和中国批准为新型食品原料,使其在食品、医药等方面的需求日益增加;

2、 以乙酰基氨糖(GlcNAc)和丙酮酸(Pyruvate)为底物,利用微生物资源及其数据库,挖掘了新型的酶元件,组装了高效、不可逆的三步法燕窝酸(Neu5Ac)合成途径;再通过酶分子理性改造,强化了酶元件在合成途径中的正向反应速率,提升Neu5Ac积累量;接着通过基因工程策略理性设计了AGE、PpsA、NeuB三种酶在胞内外的空间差异分布,实现了酶元件与细胞的定向自组装,增强了丙酮酸的正向转化,提升了燕窝酸产物得率;最后,对全细胞转化体系进行了全面优化,从而为获得了以乙酰基氨糖和丙酮酸为底物高效合成燕窝酸的全细胞转化体系;

3、 利用菌体内的酶作为催化剂,将底物转化成产物的过程,由于其过程简便、反应条件温和、副产物少和产率高的优势,是一种低污染、低能耗、高效率的全细胞转化技术。

02 高纯度3’-唾液酸乳糖的分离纯化

燕窝-燕窝酸的应用

燕窝-燕窝酸的应用

技术简介:

1、 人乳低聚糖(HMOS)是继乳糖和脂肪之后,人乳中含量第三丰富的成分,具有重要的生物学功能。唾液酸寡糖(SL)是一种酸性的人乳低聚糖,根据唾液酸与乳糖部分结合的位置可分为3’-唾液酸乳糖(3’-SL)和-唾液酸乳糖 (6’-SL),现有研究表明3’-SL对婴儿具有重要作用,包括中和肠道细菌产生的毒素、防止细菌或病毒粘附到肠道上皮表面等方面;

2、 采用单菌多酶法结合一步纯化及固定化方法将多酶进行固定,实现一锅法唾液酸乳糖制备过程中CTP再生和多酶的循环利用,本技术基于该多酶催化制备3’-SL的转化液而开发了一种对转化液中3’-SL进一步分离纯化方法,以期进一步提升产物3’-SL的纯度;

3、 通过对转化液进行加热灭酶过滤、调节滤液pH至碱性后过滤,将滤液的pH调节至中性、经浓缩、离子吸附、干燥等步骤,得到分离纯化的3’-SL;本技术采用加热灭酶和调节pH至碱性两种方式综合提升转化液中蛋白等大分子物质的去除率,同时控制浓缩液中3’-SL的浓度,对于阴阳离子吸附纯化进一步提高产物3’-SL的纯度具有重要作用,综合上述方法获得的产物3’-SL的纯度≥96%。

0 高产唾液酸乳糖的工程菌及其构建方法

高产唾液酸乳糖的工程菌

高产唾液酸乳糖的工程菌

技术简介:

1、通过对野生型PSA菌株进行改良,无需转入外源SA合成途径基因,对底盘扰动少;通过转入neuABC基因,从而增加了CMP-SA的积累,同时敲除了neuS、neuE基因,减少杂合多糖的干扰,继而提高唾液酸乳糖产量。本技术提供的高产唾液酸乳糖的重组大肠杆菌工程菌具有很好的应用前景,为生物法合成唾液乳糖提供新思路;

2、 通过弱化原始菌株中聚唾液酸转移酶基因neuS和B-半乳糖酶基因LacZ,获得的基因弱化菌株;或者通过弱化原始菌株中聚唾液酸转移酶基因neuS、多唾液酸合成蛋白基因neuE和B-半乳糖昔酶基因LacZ,获得的基因弱化菌株;

3、 增强基因弱化菌株中乙酷神经氨酸合成酶基因neuB、CMP-乙酷神经氨酸合成酶基因neuA、N-乙酷葡萄糖胺异构酶基因neuC以及a-23唾液酸转移酶基因nsl或a-2,6唾液酸转移酶基因nst,获得基因增强菌株,或者,增强上述基因弱化菌株中乙酷神经氨酸合成酶基因neuB、CMP-乙酷神经氨酸合成酶基因neuAN-乙酷葡萄糖胺异构酶基因neuC、a-2,3唾液酸转移酶基因nst或a-2,6唾液酸转移酶基因nst以及B-半乳糖首透性酶基因LacY,获得基因增强菌株。

04 生产燕窝酸的益生菌株组合物

益生菌株组合物

益生菌株组合物

技术简介:

1、燕窝酸是中国传统名贵滋补食品燕窝中具生物活性的主要成份,燕窝中的燕窝酸含量约为8-13%,顶级燕窝的燕窝酸含量可高达15%。燕窝酸又名唾液酸(SialicAcid),是一类天然糖类化合物,这些化合物大多是N-乙酰神经氨酸的O-乙酰基衍生物,其中分布最广的最具代表性的是N-乙酰神经氨酸;

2、 以唾液乳杆菌为益生菌株,以原始菌株唾液乳杆菌TCI153制成的益生菌株组合物中均含有益生菌和燕窝酸,活菌数均大于 5×109 cfu/ml,相对于传统菌株,本发明所生产的菌株在燕窝酸的产量上具有明显的优势,为其在食品、保健、医药上日益广阔的应用前景提供了有利的条件。

05 蛋黄粉提取燕窝酸

蛋黄粉

蛋黄粉

技术简介:

1、燕窝酸的提取工艺,从乳清及蛋黄粉中提取,在实际生产中又许多的困难不能解决,如脱脂困难,有些工艺需要大量的有机溶媒,会污染环境并对生产环境有破坏影响,不宜工业化生产。

2、 使用全脂蛋黄粉,先用特定的菠萝蛋白酶水解蛋黄粉,与先有的方法比较,去除了酸水解污染的问题。酶水解蛋黄粉的困难是脱脂和过滤问题,本技术使用树酯脱脂和去蛋白方法,克服了上述工艺不足。技术关键是,将蛋黄粉先用去离子水浸泡30min,然后加入菠萝蛋白酶,搅拌10-15min,控制温度25-30℃,放置时间12-18hr,在加入去离子水和藻酸钠,搅拌10min,离心过滤,取上清液。用酸调PH值到4-5,过大孔树脂柱D105,收集洗脱液,过离子交换树脂,氢阳离子交换110型,在过铵型阳离子125型,水洗,PH3-4值梯度洗脱,收集PH4洗脱液,调PH值6-8,静置,过滤,母液冷冻,浓缩结晶,烘干得到成品,是一种有效,快速的,高质量,高收率的从蛋黄粉中提取燕窝酸的生产方法;

3、 与现有技术相比,本发明的技术特征是使用菠萝蛋白酶解蛋黄粉,通过使用这种酶解工艺,配合上大孔树酯脱脂工艺,克服了酶解蛋黄粉脱脂难的问题,工艺简单,无环境污染,提取燕窝酸收率高,产品含量高,是一种适合工业化大规模生产的方法。

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