浸膏中叶黄素含量的检测方法
- 范围
本方法适用于万寿菊浸膏中叶黄素含量的检测，本方法参考美国AOAC热皂化法鉴定叶黄素含量。
- 实验仪器
紫外/可见分光光度计（SHIMADZU UV1700）
1cm比色皿
分析天平
水浴锅
超声提取器
1ml、2ml 、5ml、25ml移液管
50ml 、100ml容量瓶
3、化学试剂及药品
甲醇（分析纯）
丙酮（分析纯）
正己烷（分析纯）
甲苯（分析纯）；
无水乙醇（分析纯）
无水硫酸钠（分析纯）
氢氧化钾（分析纯）
4、实验步骤
4.1试剂的配制
4.1.1 提取液的配制：正己烷、丙酮、无水乙醇、甲苯按照10：7：6： 7的体积比混合。
4.1.2 40%（w/v）氢氧化钾/甲醇溶液：称取40g氢氧化钾于100ml烧杯中，加入尽少量的水，用玻璃棒搅拌使之充分溶解，然后把溶液转移至100ml容量瓶中，少量甲醇多次冲洗烧杯，冲洗液也转移到容量瓶中，待溶液冷却至室温，再用甲醇定容至刻度，摇晃均匀。
4.1.3 10%硫酸钠溶液的配制：称取100g无水硫酸钠到1000ml烧杯中，加入约500ml已预热的蒸馏水（约50℃），用玻璃棒快速搅拌使之充分溶解，然后把溶液转移至1000ml容量瓶中，再用少量蒸馏水冲洗烧杯多次，冲洗液也转移至容量瓶中，待溶液冷却至室温后用蒸馏水定容至1000ml。
4.2 样品准备及检测
4.2.1样品称量前须放入56℃的水浴中搅拌均匀，确保样品有良好的均一性及流动性。
4.2.2 称取样品0.03～0.05g（实际称量重量可视样品具体含量而调整）于100ml容量瓶中。准确记录下称取重量（W）。
4.2.3 加入30ml提取液及2ml 40%KOH/甲醇溶液。
4.2.4 容量瓶接上冷凝管，于56℃水浴中加热20min。
4.2.5 取出容量瓶，盖上橡胶塞，冷水冷却至室温。
4.2.6 加入30ml正己烷，用10%硫酸钠定容至刻度，塞上塞子，剧烈振荡1min，于黑暗处放置约50min。
4.2.7 移取1ml上清液于50ml容量瓶中，正己烷定容至刻度，并摇晃均匀。正己烷作空白，于474nm波长处检测吸光值。
注：吸光值一定要控制在0.300～0.700范围内，如果超出此范围要调整稀释倍数。
4.2.8校正系数测定
4.2.8.1 苏丹Ⅰ标准品：苏丹Ⅰ用无水乙醇再次结晶的标准品：称取8克苏丹Ⅰ，加300ml乙醇75℃完全溶解，真空过滤，除去杂质，冷却结晶，再次过滤，70℃真空烘箱至恒重。
4.2.8.2苏丹Ⅰ浓缩液（1.0毫摩尔）：苏丹Ⅰ标准品0.1241g溶于丙酮、异丙醇(1:1V/V)混合液500ml中，避光储存。
4.2.8.3苏丹Ⅰ工作溶液（0.04毫摩尔）：吸取2ml浓缩液于50ml的容量瓶中，用丙酮、异丙醇（1：1）混合液中，摇晃均匀，于474nm处检测吸光值。
f=0.561/A474苏丹Ⅰ（0.04毫摩尔）
5、 计算
A474：样品在474nm处的吸光值
稀释倍数：2500
固定系数：236
W：样品重量（g）
f: 校正系数（4.2.8）